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    常見(jiàn)問(wèn)題

    細(xì)胞凍存液氮罐的具體操作步驟和細(xì)胞復(fù)蘇流程

    發(fā)布時(shí)間:2020-08-11 11:11:11 瀏覽:3386次

           細(xì)胞凍存液氮罐的具體操作步驟和細(xì)胞復(fù)蘇流程

      大量細(xì)胞如何儲(chǔ)存在液氮罐里,液氮罐里一般灌有低溫液氮,細(xì)胞的儲(chǔ)存需要低溫環(huán)境,放入-196度的液氮里對(duì)細(xì)胞是長(zhǎng)期保存的一個(gè)適合的環(huán)境。細(xì)胞凍存液氮罐是將細(xì)胞存入液氮罐的液相里儲(chǔ)存,有專(zhuān)用的方形抽屜式提籃,2ml凍存管放入凍存盒然后再放入提籃后浸入液氮里,*浸入。使細(xì)胞*處于液氮-196度環(huán)境下,才能夠長(zhǎng)期保存細(xì)胞。

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      細(xì)胞凍存液氮罐的具體操作步驟:

      1、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中細(xì)胞按常規(guī)方法消化,或分離獲得原代細(xì)胞后,收集于離心管中。

      2、使用離心機(jī)離心,去除上清,收集細(xì)胞沉淀。

      3、根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)密度加入適量的LiveCyteTM細(xì)胞凍存液進(jìn)行重懸,充分混勻。

      4、將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中,直接放置于-80°C冰箱保存。24小時(shí)后可移入液氮長(zhǎng)期保存(可選)。

      細(xì)胞凍存液氮罐的細(xì)胞復(fù)蘇流程:

      1、從-80°C冰箱或液氮罐中取出細(xì)胞。

      2、迅速放入37°C水浴,并不時(shí)搖動(dòng),在3分鐘之內(nèi)使其*融化。

      3、在凍存管中加入少量*培養(yǎng)基,再將細(xì)胞混合液移入含有該細(xì)胞*培養(yǎng)基的離心管中,樣品和培養(yǎng)基比例為1:10,然后輕輕吹打,混合均勻。

      4、離心后去除上清,收集細(xì)胞沉淀。

      5、輕輕彈松細(xì)胞沉淀,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,輕輕晃動(dòng)使細(xì)胞分布均勻,置于37℃孵箱中培養(yǎng)。


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