細胞凍存液氮罐的具體操作步驟和細胞復蘇流程

       細胞凍存液氮罐的具體操作步驟和細胞復蘇流程

　　大量細胞如何儲存在液氮罐里，液氮罐里一般灌有低溫液氮，細胞的儲存需要低溫環境，放入-196度的液氮里對細胞是長期保存的一個適合的環境。細胞凍存液氮罐是將細胞存入液氮罐的液相里儲存，有專用的方形抽屜式提籃，2ml凍存管放入凍存盒然后再放入提籃后浸入液氮里，*浸入。使細胞*處于液氮-196度環境下，才能夠長期保存細胞。

　　細胞凍存液氮罐的具體操作步驟：

　　1、培養皿或培養瓶中細胞按常規方法消化，或分離獲得原代細胞后，收集于離心管中。

　　2、使用離心機離心，去除上清，收集細胞沉淀。

　　3、根據細胞生長密度加入適量的LiveCyteTM細胞凍存液進行重懸，充分混勻。

　　4、將細胞懸液分裝至凍存管中，直接放置于-80°C冰箱保存。24小時后可移入液氮長期保存(可選)。

　　細胞凍存液氮罐的細胞復蘇流程：

　　1、從-80°C冰箱或液氮罐中取出細胞。

　　2、迅速放入37°C水浴，并不時搖動，在3分鐘之內使其*融化。

　　3、在凍存管中加入少量*培養基，再將細胞混合液移入含有該細胞*培養基的離心管中，樣品和培養基比例為1：10，然后輕輕吹打，混合均勻。

　　4、離心后去除上清，收集細胞沉淀。

　　5、輕輕彈松細胞沉淀，加入適量培養液后接種于培養瓶或培養皿中，輕輕晃動使細胞分布均勻，置于37℃孵箱中培養。